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供 UV 激发的氩离子和氪离子激光器 Laser (nm) 发和探测的指标。这些微球，包括最
320 nm
而言，有了相当大的改进，因为它们 BUV395 BUV496 BUV563 暗淡的种类，可以很容易地用这个激
355 nm BUV661 BUV737 BUV805
体积更小，并且更容易维护。然而， 375 nm 光源解析（见图 3b）。灵敏度与等效
这些激光源仍然价格昂贵，通常是更 405 nm BV570 BV421 BV480 BV510 功率水平的 355nm 激光器相似。然
BV650 BV787
BV605
488 nm Fluorescein Alexa Fluor 488 BB dyes
高端仪器中成本最高的部件。 PerCP PerCP-Cy5.5 后使用与 BUV563 和 BUV661（两种
532 nm Phycoerythrin (PE) PE-Texas red
较低成本的近紫外激光二极管 552 nm PE-Cy5 PE-Cy5.5 PE-Cy7 BUV 染料）偶合的抗体，将小鼠脾
（375nm）可用于替代许多 UV 激发染 561 nm BYG dyes 细胞标记为细胞表面标志物。320nm
640 nm APC APC-Cy5.5 APC-Cy7
[3]
料（包括 BUV）的 355nm 光 源。 Cy5 Alexa Fluor 647 模块激发这些样品几乎与 355nm 光
685 nm Alexa Fluor 660 Alexa Fluor 680
Alexa Fluor 750
Alexa Fluor 700
然而，它们的波长非常接近系列中最 Alexa Fluor 790 IR780 源同样好（见图 3c 和 3d）。
短的 BUV395 的发射范围，使其难以 图2：流式细胞术中使用的荧光探针与激发所需的 因 此，LASOS 320nm 激光源
激光波长配对的抽样展示。这些探针中的大多数是
探测。因此需要更便宜的固体紫外激 光谱兼容的，可以在具有足够多激光波长的仪器上 被证明是流式细胞术中 355nm 激发
同时使用。（Brilliant Blue [BB]，Brilliant Yellow
光源，来降低高维流式细胞术的成本。 的良好替代品。这些模块比大多数
Green [BYG]，Brilliant Violet [BV]和Brilliant
Ultraviolet [BUV]染料是BD Sirigen公司的注册商 355nm 光源更小，并且成本更低，是
标；Pacific Blue，Alexa Fluor 647和Alexa Fluor 790
紧凑型320 nm激光模块 高维流式细胞术的颇具成本效益的理
是赛默飞世尔科技的注册商标。）
随着近来德国 LASOS 公司开发 想选择。在这个范围内和整个可见光
的小型空冷单元连续波（CW）发射 替常规的 355nm 紫外激光源（见图 谱范围内的小型固体激光源，已经彻
[4]
小型固体 320nm 激光模块的发展，这 3a）。 然后将激光对准到用于将细 底改变了流式细胞术，减少了现代仪
种情况已经得到改变。历史上流式细 胞注入激光路径的液体流中。最初为 器的尺寸、成本和维护需求。这是技
胞仪配备过氦镉（HeCd）激光器，利 355nm 激光源配置的仪器的光学元 术发展中的一项令人鼓舞的趋势，并
用其 325nm 激光束激发紫外染料。然 件，在 320nm 时依然有效，其中宽 将继续为更好的生物医学分析仪器做
而，HeCd 激光器体积庞大，但功能 带 UV 镜用于将激光转向样品流，熔 出贡献。
却不强大，并且随着年限的增加会出 融石英透镜用于聚焦光束。
现噪声问题。320nm 光源的波长与该 流式细胞术使用荧光染料标记的 参考文献
传统波长非常接近，并且基于激发光 聚合物微球作为模拟样品，以确定仪 1. W. G. Telford, Methods Cell Biol.,
谱预测、能够更好地激发 BUV 染料。 器操作是否最佳，并测试新的激光源。 102, 375–410 (2011); doi:10.1016/
为了测试这种激光波长和光源 实验还分析了暗淡和明亮的紫外激发 b978-0-12-374912-3.00015-8.
是否适用于流式细胞术，将一个模块 微 球（InSpeck Blue 微球）混合物， 2. P. K. Chattopadhyay et al., Cytometry
安装在 BD LSR II 流式细胞仪上，代 因为最暗淡种类的分辨率是良好的激 A, 81, 456–466 (2012).
InSpeck Blue microspheres 3. W. G. Telford, Cytometry A, 87, 1127–
(7 populations) BUV563 mCD8 BUV661 mCD45 1137 (2015).
b) c) d)
a) 2000
355 nm 1500 4. W. G. Telford, L. Strickland, and M.
20 mV 1000 Koschorreck, Cytometry A, 91, 314–
500
0 325 (2017).
10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5
BUV496-A BUV563-A BUV661-A
1500
320 nm 1000
20 mV
500
0
10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5
450/50 nm 575/25 nm 660/20 nm
图3：体积紧凑的LASOS 320 nm激光模块（a）。用20mW的320nm（上图）或355nm（下图）激光源分
析InSpeck Blue微球混合物（7种）（b）。以20mW的320 nm（上图）或355nm（下图）激光源分析用
BUV563或BUV661标记的小鼠脾细胞（c和d）。彩色线表示标记的细胞，灰色线表示未标记的对照组。
用于InSpeck Blue微球BUV563BU和BUV661标记细胞的带通滤光片的光谱曲线在直方图中给出。

14 Nov/ Dec 2017 www.laserfocusworld.com.cn Laser Focus World China 激光世界