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应用天地 Applications

紫外荧光激发

新型 320nm 紫外激光源增强流式细胞术

320nm激光源使高维流式细胞术更容易、更经济，这将为更好的生物医学
分析仪器贡献力量。

文/William Telford，Lynn Strickland，Marco Koschorreck

BD Sirigen 公司提供的七种 BV 染料
流 式细胞术是生物医学科学 仪目前使用固体激光器，其波长跨越 （BV421、BV480、BV570、BV605、
从紫外（~355nm）到远红光（~700nm）
中的基础技术，其中使用
激光激发附着于细胞的 的整个可见光谱。 BV650 和 BV787）光谱兼容，显著
分子荧光标记，并使用光电倍增管 先进的细胞仪可以配备多达 10 增加可以分析的同时进行细胞标记的
（PMT）和其他光感测技术进行探测 种不同的单波长激光器，可激发出具 数量。紫外（UV）激光器在流式细
（见图 1）。细胞以流体动力学聚焦的 有不同激发 / 发射特性的非常多的荧 胞术中已经取得了新的重要性，BD
液体流引入激光束。 光探针。尽管早期的仪器只能激发和 Sirigen 公司最近开发了六种 Brilliant
一些流式细胞仪仅分析附着在细 检测一个或两个探针，但是现在已经 Ultraviolet 紫外染料（BUV395、
胞表面或内部的荧光标记。在荧光激 可以在先进仪器上同时探测 30 个或 VUV496、BUV563、BUV661、
活细胞分选器（FACS）中，液流被 更多的荧光探针。这种高维分析已将 BUV737 和 BUV805），将同时进行荧
分解成液滴，液滴被蓄以静电并转移 人类对免疫系统的认知扩展到了前所 光分析的总数增加到近 30 个。紫外
到收集管中。细胞分选允许基于荧光 未有的水平。 激光现在是先进流式细胞术仪器的关
标记分离和收集细胞，允许收集的细 现代流式细胞仪使用许多激光波 键组成部分。
胞用于功能研究、蛋白质组学和基因 长和相应的荧光探针，以同时分析 20 现代流式细胞仪主要依靠三倍频
组分析。 个或更多的细胞特征。先进仪器通常 掺钕钒酸盐（Nd ：YVO 4 ）的 355nm
流式细胞术一直是扩大人类对免 将配备青光激光器（488nm）、红光 固体激光器来激发 BUV 和其他紫外
疫系统、癌症生物学和传染病的理解 激光二极管（~640 nm）和绿光、黄 激发染料。这些激光器相对于以前提
的关键工具。该技术用到的标记细胞 绿光或黄光二极管泵浦固体（DPSS）
Nozzle
的荧光探针，可以鉴定复杂混合物中 激 光 器（532nm、552nm 或 561nm）。
的各种细胞类型，以及单细胞的物理 这些激光器都激发各种荧光染料（见
和生理特征。 图 2）。
Light collection
紫光激 光二极管 是随着 BD objective
流式细胞术的激光背景 Sirigen 公司的 Brilliant Violet（BV） Laser intercept
[2]
流式细胞术绝对依赖于激光技术 聚合物染料发展起来的重要激发源。
[1]
来激发这些荧光标签。 最早的流式 Dichroics
图1：基本流式细胞仪的操作示意图。通过
细胞仪采用单个激光器（当时通常是 流体动力学聚焦的液体流，将细胞通过喷嘴
或封闭石英流动池引入激光束中。信号收集 Filters
大型水冷离子激光器）激发最多一个
光学元件收集激发的荧光信号，使用二向色
或两个荧光探针，包括常见的荧光染 镜和窄带通滤光片转向PMT。现代仪器可以 PMTs 585/42 nm 530/30 nm Side scatter
利用光纤光学进行激光传输和信号采集。
料如荧光素和罗丹明。现代流式细胞

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